Evaluation of Toxocara canis Glycosylated TES Produced in Pichia pastoris for Immunodiagnosis of Human Toxocariasis

Abstract Recombinant proteins are a suggested alternative for the diagnosis of toxocariasis. The current Escherichia coli recombinant protein overexpression system usually produces insoluble products. As an alternative, yeast such as Pichia pastoris have secretory mechanisms, which could diminish the cost and time for production. This study aimed to produce recombinant proteins in Pichia pastoris and verify their sensibility and specificity in an indirect ELISA assay. Two sequences (rTES-30 and rTES-120) of Toxocara canis excretory-secretory antigens were cloned in a pPICZαB vector and expressed in P. pastoris KM71H. Sera samples collected from human adults infected by Toxocara spp. were tested by indirect ELISA using rTES-30 and rTES-120 as antigens. Recombinant proteins were detected at 72 hours after induction, in the supernatant, as pure bands between 60~70 kDa with hyperglycosylation. Regarding diagnosis potential, recombinant antigens had high specificity (95.6%); however, sensitivity was 55.6% for rTES-30 and 68.9% for rTES-120. Further deglycosylation of the P. pastoris antigens did not seem to affect ELISA performance (p>0.05). The low sensitivity in the serodiagnosis diminished any advantage that P. pastoris expression could have. Therefore, we do not recommend P. pastoris recombinant TES production as an alternative for the diagnosis of toxocariasis.

Fungemias por hansenula anómala en el Hospital Privado Centro Médico de Caracas / Fungemia by hansenula anomala in the Hospital Privado Centro Médico of Caracas

Se revisaron en forma retrospectiva las histórias clínicas de todos los pacientes en los cuales se aisló Hansenula anómala en los hemocultivos realizados en el Laboratorio de Microbiología del Hospital Privado Centro Médico de Caracas, en el lapso de 2 años y medio, comprendido entre agosto 1994 y febrero 1997. De 57 pacientes se obtuvo 64 hemocultivos positivos, aislándose 64 especies de Candida. Hansenula anómala se obtuvo en 15 hemocultivos de 15 pacientes diferentes, representando un 26,3 por ciento del total de pacientes, un 23,4 por ciento del total de las candidas y un 30,6 por ciento de las variedades no albicans. La Candida albicans se aisló en 15 pacientes (26,3 por ciento del total). De los pacientes que presentaron Hansenula anómala en sus hemocultivos, el 100 por ciento cumplieron con criterios clínicos de severidad. El rango de edad estaba comprendido entre 1 mes y 76 años, con una media de 43, de los cuales 6 eran masculinos y 9 femeninos. De este grupo de pacientes, 12 ingresaron con patología abdominal, siendo intervenidos quirúrgicamente 10 de estos. De los tres pacientes restantes, dos ameritaron cirugía no abdominal. Todos los pacientes recibieron antibióticos de amplio espectro, nutrición parenteral total y le fue colocado catéteres centrales. Nueve pacientes (60 por ciento) tuvieron criterios de sepsis. Los días de hospitalización oscilaron entre 7 y 101 días, con un promedio de 37. Doce pacientes ameritaron ingreso a la Unidad de Terapia Intensiva. Se inició Anfotericina B en 8 pacientes, con buena respuesta en el 100 por ciento. Seis pacientes recibieron como terapia inicial Fluconazol: 2 con respuesta satisfactoria; 1 fallecido no relacionado con la infección por Hansenula anómala y los tres restantes ameritaron cambio a Anfotericina B. Un paciente no recibió tratamiento antifúngico desconociéndose su evolución.